CRECIMIENTO MICROBIANO
Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiología y Genética. Facultad de Farmacia.
Universidad de Salamanca
I.- TIEMPO DE GENERACION
II.- CURVA DE CRECIMIENTO
III.- CRECIMIENTO SINCRONICO
IV.- CULTIVO CONTINUO
V.- DETERMINACION DEL CRECIMIENTO MICROBIANO
VI.- EFECTO DE LOS FACTORES AMBIENTALES SOBRE EL
CRECIMIENTO
- Temperatura
- pH
- Agua
- Oxígeno
I.- TIEMPO DE GENERACION
Las principales reacciones de la síntesis celular son reacciones
de polimerización, proceso por el cual los polímeros (macromoléculas)
se sintetizan a partir de monómeros: síntesis de DNA, RNA
y proteínas; que una vez sintetizadas se ensamblan formando las estructuras
celulares tales como la envuelta celular, flagelos, ribosomas, cuerpos de
inclusión, etc. En la mayor parte de los microorganismos este crecimiento
continúa hasta que las células se dividen en dos nuevas células.
El tiempo que requiere una célula para completar su ciclo es muy
variable y depende de factores nutricionales y genéticos. El intervalo
que transcurre en la formación de dos células a partir de
una célula se llama generación y el tiempo requerido para
esto es el tiempo de generación.
Cálculo del tiempo de generación
Tiempo de generación (G) es el tiempo requerido para que una célula
se divida o una población se duplique.
t
G = -----
n
Si partimos de una célula al cabo de una generación habrá
duplicado su número y así sucesivamente en cada generación.
Como se puede comprobar el crecimiento se produce en progresión geométrica:
1 generación -------------> 2 células = 21
2 generaciones -------------> 4 células = 22
3 generaciones -------------> 8 células = 23
4 generaciones -------------> 16 células = 24
5 generaciones -------------> 32 células = 25
Si partimos de N células (en microbiología los estudios
se realizan con poblaciones), a un tiempo determinado (Ta) tenemos un número
de células determinadas (Na). En la primera generación se
duplicará el número de células (2Na) y así sucesivamente
de tal manera que al cabo de un tiempo determinado Tb el número de
células determinadas será Nb (Nb = 2n Na) donde n es el número
de generaciones transcurridas desde Ta hasta Tb. En esta fórmula
(Nb = 2n Na) conocemos todos los parámetros excepto el número
n de generaciones transcurridas por lo que aplicando logaritmos será
posible calcularlo. Una vez obtenido el número de generaciones n
transcurridas en un tiempo t podremos calcular el tiempo de generación
G para ese microorganismo.
Ta -------------> Na
1 generación -------------> 2Na = 21 Na
2 generaciones -------------> 4Na = 22 Na
3 generaciones -------------> 8Na = 23 Na
4 generaciones -------------> 16Na = 24 Na
5 generaciones -------------> 32Na = 25 Na
n generaciones (Tb) -------------> Nb = 2n Na
Nb = 2n Na
lg Nb = n lg 2 + lg Na
lg Nb - lg Na
n = ------------------------
lg 2
lg Nb / Na
n = ----------------
lg 2
Nb
n = 3,3 lg --------
Na
t
G = --------------------
3,3 lg Nb / Na
El tiempo de generación de la levadura Saccharomyces cerevisiae es
de 90 minutos y el de la bacteria Escherichia coli es 20 minutos. Esta bacteria
tiene un crecimiento muy rápido de tal manera que a partir de una
sóla célula se obtienen al cabo de 8 horas (8 x 60 = 480 minutos;
480 : 20 = 24 generaciones; 224 = 2 x 106 células) 2 millones de
células. Esta misma bacteria al cabo de dos días se habría
multiplicado hasta 2,2 x 1043 células. Una bacteria pesa aproximadamente
10-15 - 10-11 gramos por lo que el peso de todas estas células es
de aproximadamente 2,2 x 1030 gramos que equivalen a 8 veces el peso de
la Tierra.
II.- CURVA DE CRECIMIENTO
Es la representación gráfica del logaritmo del número
de células frente al tiempo. La curva teórica sería
una recta pues los microorganismos estarían creciendo constantemente
pero en la práctica la curva presenta distintas fases:
- Fase de latencia: período de adaptación de un
microorganismo a un nuevo medio de cultivo.
- Fase exponencial o logarítmica: aumento regular de la
población que se duplica a intervalos regulares de tiempo (G).
- Fase estacionaria: cese del crecimiento por agotamiento de
nutrientes, por acumulación de productos tóxicos, etc.
- Fase de declinación o muerte: el número de células
que mueren es mayor que el número de células que se dividen.
Las propiedades de un microorganismo dependerán de la fase de la
curva en que se encuentren (la producción de antibióticos
se lleva a cabo en la fase estacionaria).
III.- CRECIMIENTO SINCRONICO
Hasta ahora se ha descrito el modelo de crecimiento de poblaciones bacterianas.
Estos estudios no permiten concluir nada sobre el tipo de crecimiento de
las distintas células ya que en la mayoría de los cultivos
bacterianos el tamaño celular está distribuido al azar. Para
obtener información sobre el tipo de crecimiento de las distintas
bacterias debe recurrirse a los cultivos sincrónicos, es decir, cultivos
en los que todos los individuos de una población están en
la misma etapa del ciclo celular. Esto se puede conseguir por diversas técnicas:
Inducción: cambios repetitivos de temperatura o suministrando
nutrientes.
Selección: filtración o centrifugación diferencial.
Una curva de crecimiento sincrónico es del siguiente tipo: el número
de células del cultivo permanece aproximadamente constante durante
el tiempo en el que las células recién formadas aumentan de
tamaño; luego, el número de células se duplica de manera
brusca.
IV.- CULTIVO CONTINUO
Consiste en mantener la población microbiana en fase exponencial
de crecimiento. Se utiliza en fermentaciones industriales que requieren
actividad metabólica máxima. Los sistemas de cultivo contínuo
pueden hacerse funcionar como quimiostatos o como turbidostatos. En un quimiostato
la velocidad de flujo de entrada y salida de nutrientes se mantiene a un
valor determinado de tal manera que la velocidad de crecimiento del cultivo
queda ajustada a esa velocidad de flujo. En un turbidostato el sistema incluye
un dispositivo óptico que regula la turbidez controlando la velocidad
de flujo.
V.- DETERMINACION DEL CRECIMIENTO
MICROBIANO
El cálculo del número de células que existen en
una suspensión se puede llevar a cabo mediante el recuento celular
(microscopía, número de colonias), masa celular (peso seco,
medida del nitrógeno celular, turbidimetría) o actividad celular
(grado de actividad bioquímica en relación al tamaño
de la población). Todos estos métodos se clasifican en dos
apartados: métodos directos y métodos indirectos.
- Métodos directos:
- Recuento del número de células en una cámara
Thoma
- Peso seco celular
- Determinación de nitrógeno o de proteínas totales
- Determinación de DNA
- Métodos indirectos:
- Recuento de colonias en placa
- Recuento sobre filtro de membrana
- Consumo de oxígeno
- Liberación de dióxido de carbono
- Concentración de un enzima constitutivo
- Decoloración de un colorante
- Incorporación de precursores radiactivos
- Medida de la turbidez
VI.- EFECTO DE LOS FACTORES AMBIENTALES
SOBRE EL CRECIMIENTO
No todos los microorganismos responden de la misma manera a los factores
ambientales, lo que para unos puede ser beneficioso para otros es perjudicial.
Temperatura
Es de los factores ambientales que más influye en el crecimiento
de los microorganismos. Al aumentar la temperatura aumenta la velocidad
de las reacciones enzimáticas hasta una cierta temperatura a la cual
las proteínas, DNA y otras macromoléculas son sensibles y
se desnaturalizan. Cada microorganismo tiene una temperatura mínima,
óptima y máxima de crecimiento. La temperatura óptima
siempre está más cerca de la temperatura máxima que
de la mínima.
pH
Debido a que los microorganismos cambian el pH del medio cuando crecen se
debe añadir un tampón en el medio para mantener el pH constante.
Estos tampones funcionan en un rango de pH por lo que se deben utilizar
diferentes tampones dependiendo del pH que se quiera en el medio. Para pH
neutros se utiliza el tampón fosfato. Los ambientes naturales tienen
un rango de pH que oscila entre 5 y 9. Los microorganismos que crecen a
pH inferiores a 5 se denominan acidófilos (Thiobacillus
pH: 0,5). Los microorganismos que crecen a pH superiores a 9 se denominan
alcalinófilos (Bacillus pH: 11).
Agua
Todos los organismos requieren H2O para vivir. Las sustancias absorben en
mayor o menor medida moléculas de H2O que no están disponibles
para los organismos. Esta disponibilidad del H2O es lo que se llama potencial
de agua (aw) cuyos valores van de 0 a 1. El aw del H2O pura es 1; el
aw de los frutos secos es 0,7; el aw de los campos de cultivo se sitúa
entre 0,9 y 1,0.
Oxígeno
- Aerobios
- Obligados Requieren O2 para crecer (21 %)
- Facultativos No requieren pero crecen mejor en presencia
de O2
- Micraerófilos Requieren pero a niveles más bajos
que los atmosféricos (1 - 15 %)
- Anaerobios
- Aerotolerantes No requieren y crecen peor cuando el O2 está
presente
- Obligados La presencia de O2 es letal